細(xì)胞名稱：人胚肺成纖維細(xì)胞CCC-HPF-1

產(chǎn)品規(guī)格：T25培養(yǎng)瓶x1；1.5ml凍存管x2

細(xì)胞數(shù)量：1x10^6；1x10^6

保存溫度：37℃；-198℃

運(yùn)輸方式：常溫保溫運(yùn)輸；干冰運(yùn)輸

安全等級(jí)：1

用途限制：僅供科研3類

培養(yǎng)體系：DMEM高糖培養(yǎng)基+10%FBS+1%雙抗

培養(yǎng)溫度：37℃

二氧化碳濃度：5%

簡(jiǎn)介：兔胚胎成纖維細(xì)胞RPEF，成纖維樣，貼壁培養(yǎng)，波形蛋白、纖維連接蛋白陽(yáng)性。消化時(shí)間建議5分鐘，請(qǐng)各位學(xué)者注意。

注釋：倍增時(shí)間43h

STR信息：/

參考文獻(xiàn)：/

驗(yàn)收細(xì)胞注意事項(xiàng)

1、收到兔胚胎成纖維細(xì)胞RPEF細(xì)胞，請(qǐng)查看瓶子是否有破裂，培養(yǎng)基是否漏出，是否渾濁，如有請(qǐng)盡快聯(lián)系。

2、收到兔胚胎成纖維細(xì)胞RPEF細(xì)胞，如包裝完好，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞。,由于運(yùn)輸過程中的問題，細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的貼壁細(xì)胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞懸浮的情況，出現(xiàn)此狀態(tài)時(shí)，請(qǐng)不要打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶，應(yīng)立即將培養(yǎng)瓶置于細(xì)胞培養(yǎng)箱里靜止3-5小時(shí)左右，讓細(xì)胞先穩(wěn)定下，再于顯微鏡下觀察，此時(shí)多數(shù)細(xì)胞會(huì)重新貼附于瓶壁。如細(xì)胞仍不能貼壁，請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，如臺(tái)盼藍(lán)染色證實(shí)細(xì)胞活力正常請(qǐng)按懸浮細(xì)胞的方法處理。

3、收到兔胚胎成纖維細(xì)胞RPEF細(xì)胞后，請(qǐng)鏡下觀察細(xì)胞，用恰當(dāng)方式處理細(xì)胞。若懸浮的細(xì)胞較多，請(qǐng)離心收集細(xì)胞，接種到一個(gè)新的培養(yǎng)瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養(yǎng)基，使用進(jìn)口胎牛血清。剛接到細(xì)胞，若細(xì)胞不多時(shí)血清濃度可以加到15％去培養(yǎng)。若細(xì)胞迏到80%左右，血清濃度還是在10％。

4、收到兔胚胎成纖維細(xì)胞RPEF細(xì)胞時(shí)如無異常情況，請(qǐng)?jiān)陲@微鏡下觀察細(xì)胞密度，如為貼壁細(xì)胞，未超過80%匯合度時(shí)，將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)基吸出，留下5-10ML培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)：超過80%匯合度時(shí)，請(qǐng)按細(xì)胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細(xì)胞，吸出培養(yǎng)液，1000轉(zhuǎn)/分鐘離心3分鐘，吸出上清，管底細(xì)胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞后移回培養(yǎng)瓶。

5、將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，蓋子微微擰松。吸出的培養(yǎng)基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于4℃冰箱，以備不時(shí)之需。

6、24小時(shí)后，兔胚胎成纖維細(xì)胞RPEF形態(tài)已恢復(fù)并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細(xì)胞）將培養(yǎng)瓶里的培養(yǎng)基倒去，加3-5ml（以能覆蓋細(xì)胞生長(zhǎng)面為準(zhǔn)）PBS或Hanks’液洗滌后棄去。加0.5-1ml 0.25%含EDTA的胰酶消化，消化時(shí)間以具體細(xì)胞為準(zhǔn)，一般1-3分鐘，不超過5分鐘。可以放入37℃培養(yǎng)箱消化。輕輕晃動(dòng)瓶壁，見細(xì)胞脫落下來，加入3-5ml培養(yǎng)基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細(xì)胞，使之**脫落，然后將溶液吸入離心管內(nèi)離心，1000rpm/5min。棄上清，視細(xì)胞數(shù)量決定分瓶數(shù)，一般一傳二，如細(xì)胞量多可一傳三，有些細(xì)胞不易傳得過稀，有些生長(zhǎng)較快的細(xì)胞則可以多傳幾瓶，以具體細(xì)胞和經(jīng)驗(yàn)為準(zhǔn)。（懸浮細(xì)胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細(xì)胞，懸浮細(xì)胞。嚴(yán)格無菌操作。換液時(shí)，換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶和換新鮮的培養(yǎng)液，37℃，5%CO2培養(yǎng)。

特別提醒：原瓶中培養(yǎng)基不宜繼續(xù)使用，請(qǐng)更換新鮮培養(yǎng)基培養(yǎng)。